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GuiaVETA
Guia de Sistemas de Vigilancia de las Enfermedades Transmitidas por Alimentos (VETA) y la Investigación de brotes

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ANEXO C

EQUIPAMIENTO E INSTRUCCIONES PARA LA TOMA DE MUESTRAS EN LA INVESTIGACIÓN DE ETA

CONTENIDO:

1. Equipos y útiles para la toma de muestras.

2. Recolección, conservación, envase y envío de muestras de alimentos.

3. Instrucciones para la toma de muestras de especímenes clínicos de manipuladores para exámenes bacteriológicos.

4. Instrucciones generales para la recolección de muestras fecales.

 

1. EQUIPOS Y ÚTILES PARA LA TOMA DE MUESTRAS



TIPO DE EQUIPO

DESCRIPCIÓN

Envases para muestras esterilizadas

Bolsas de plástico (desechables o tipo Whirl-pak), frascos de boca ancha (0.3 a 1.5 litros de capacidad) con tapas de rosca, botellas para muestra de agua (las botellas para agua clorada deben contener suficiente tiosulfato de sodio para asegurar una concentración de 100 mg de ese compuesto por cada litro de muestra), papel de estaño o de envolver grueso (envuelto), recipientes de metal.

Implementos esterilizados y envueltos para recolección de muestras

Cucharas, cucharones, bajalenguas, cuchillos de carnicero, fórceps, pinzas, espátulas, trozos de taladro, tubos metálicos (1.25 a 2.5 cm de diámetro: 30 a 60 cm de largo) pipetas, tijeras, hisopos, hisopos de Moore (almohadillas compactas de gasas, hechas con trozos de 120 por 15cm, atadas en el centro con un hilo o alambre largo y fuerte, para muestras tomadas de alcantarillas, drenajes, arroyo, tuberías, etc).

Equipos para recolección de muestras

Envases de cartón (con tapa) para muestras de heces, frascos que contienen un preservativo y una solución para transporte, recipientes y cartones protectores para muestras de heces, hisopos esterilizados, equipos para hisopados rectales, almohadillas de gasa esterilizadas de 10 x 10 cm, tubos de medios de transporte.

Dispositivos de registro de temperatura

Termómetro tipo bayoneta (para carne) con límites que incluyan de -17.8 a 104o C (-0,04ºF a 219,2ºF) de, por lo menos, 13 cm de largo (preferiblemente 20 cm) en envase protector, termómetro con bulbo (límite -17.8 a 104oC)(-0,04ºF a 219,2ºF) en envase protector, pluma marcadora de punta fina de fieltro, rollo de cinta adhesiva, rótulos, trocitos de cartón a prueba de agua (impermeables) con ojalillos y atados con alambre, linterna, taladro eléctrico, fósforos, agua peptonada al 0.1%, agua destilada con buffer (5ml en tubos de tapa a rosca), gradilla para tubos de ensayo, caja aislada, formularios para investigadores.

Equipo de apoyo

Marcador de punta fina, rollo de cinta adhesiva, etiquetas, tarjetas a prueba de agua con perforación y alambre, linterna, taladro eléctrico, fósforos, agua peptonada o destilada bufferada (5 ml en tubos de tapa de rosca), gradilla, envase aislado, medidor de pH, hidrómetro, protocolos de investigación.

Agentes esterilizadores

Alcohol etílico (95%), antorcha de propano.

Refrigerantes

Hielo envasado, refrigerante en bolsas de plástico, líquido en latas, bolsas o jarros de plástico o goma que pueden llenarse de agua y congelarse, bolsas de plástico muy resistentes para hielo.

Ropas

Guardapolvos blancos para laboratorio, sombreros de papel, guantes de plástico desechables, botas de plástico desechables (opcionales).

 

Por lo menos, 15 bolsas de plástico o frascos de boca ancha esterilizadas, 15 cucharas esterilizadas, 8 envases para recolección de muestras o dispositivos similares y una unidad de cada kit de equipo y de esterilización, todo ello reunido en un kit que se guarda en el organismo responsable de la investigación de enfermedades transmitidas por alimentos. Para que dicho kit esté siempre en condiciones de usarse inmediatamente, se requiere su periódica reesterilización o el reemplazo de útiles, medios o medios de transporte esterilizados.

 

 

2. RECOLECCIÓN, CONSERVACIÓN, ENVASE Y ENVÍO DE MUESTRAS DE ALIMENTOS

 

MUESTRAS

 

MÉTODOS DE RECOLECCIÓN Y CONSERVACIÓN



MÉTODOS DE ENVASE Y ENVÍO



Alimentos sólidos o mezcla de dos alimentos

Cortar o separar porciones de alimentos con un cuchillo esterilizado u otro implemento, de ser necesario. Recoger asépticamente, por lo menos, 200 g de muestra con un implemento esterilizado y transferir a una bolsa de plástico esterilizada o a un frasco de vidrio de boca ancha. Tomar diferentes muestras de arriba, del centro y de otros lugares, según se considere necesario. Refrigerar la muestra.

Rotular. Colocar refrigerante alrededor del envase con la muestra. No congelar ni usar hielo seco. Llevar la muestra al laboratorio o enviarla por el medio más rápido posible.

Alimentos líquidos o bebidas

Revolver o agitar. Tomar la muestra de una de las siguientes formas:

 
 

1. Echar, con un implemento esterilizado, por lo menos, 200 ml en un envase esterilizado. Refrigerar la muestra.

Igual al anterior.

 

2. Colocar un tubo largo esterilizado en el líquido y cubrir la abertura superior con el dedo o la palma. Transferir el liquido a un jarro o a una bolsa esterilizada. Refrigerar la muestra.

Igual al anterior.

 

3. Sumergir un hisopo de Moore en el recipiente con el alimento líquido o insertarlo en una tubería para que el líquido circule a través de ella. Conservar en posición durante varias horas si es posible. Transferir el hisopo a un frasco que contenga caldo de enriquecimiento.

Llevar la muestra al laboratorio lo más pronto posible, generalmente la refrigeración no es necesaria.

 

4. Si el líquido no es viscoso, pasar 1 ó 2 litros por un filtro de membrana. Transferir asépticamente la almohadilla del filtro a un frasco de caldo de enriquecimiento.

Igual al anterior.

Alimentos congelados

Usar uno de los siguientes procedimientos:

Mantener congelado. Usar hielo seco si es necesario. Tomar o enviar en envase aislado.

 

1. Enviar o llevar pequeños volúmenes congelados al laboratorio, sin descongelar ni abrir.

 
 

2. Perforar con taladro esterilizado de diámetro grande, desde la parte superior del envase, diagonalmente por el centro, hasta la parte inferior del lado opuesto. Repetir al otro lado hasta recoger, por lo menos, 200g.

 
 

3. Picar el material congelado con martillo y cincel esterilizado y recoger las astillas con un implemento esterilizado, transferir, por lo menos, 200g a un envase estéril. Mantener congelado. Usar hielo seco si es necesario. Tomar o enviar envase aislado.

 

Carnes o aves crudas

Hacer el muestreo de una de las formas siguientes:

Igual que para alimentos sólidos o líquidos; si están en caldo de enriquecimiento, llevar al laboratorio lo más pronto posible.

 

1. Con un implemento estéril o guante plástico estéril, colocar la carcasa del ave o un gran trozo de carne en una bolsa grande estéril de plástico. Añadir 100 a 300 ml de caldo de enriquecimiento. Remover la muestra y cerrar la bolsa.

 
 

2. Pasar una esponja estéril sobre un área grande de carcasa o corte de carne. Poner el hisopo en un frasco con caldo de enriquecimiento.

 
 

3. Humedecer un hisopo con agua destilada bufferada o con agua peptonada al 0.1%. Tomar con el hisopo una parte grande de carcasa o corte de carne. Colocarlo en el caldo de enriquecimiento para el patógeno buscado.

 

4. Con un guante de plástico estéril limpiar la carcasa con cuadrados de gasa esterilizada. Poner la gasa en un frasco de caldo de enriquecimiento.

 
 

5. Cortar asépticamente una porción de carne o piel de partes diferentes de la carcasa o el corte de carne o remover una porción de carcasa. Poner, por lo menos, 200g de muestra en una bolsa plástica o frasco de vidrio esterilizado. Refrigerar.

 
 

6. Poner la carcasa de ave, parte de ave o gran porción de carne en una bolsa de plástico grande, esterilizada. Añadir 100ml de caldo de enriquecimiento y agitar. Quitar la muestra y cerrar la bolsa.

 

Alimentos deshidratados

Insertar un tubo hueco esterilizado, desde la parte superior de un lado del envase, diagonalmente por el centro, hasta la parte inferior del lado opuesto. Sostener la parte superior y transferir a un envase esterilizado. Repetir del lado opuesto hasta recoger, por lo menos, 200g. Un método alternativo consiste en recoger material con una cuchara, una espátula, un bajalengua o un implemento similar, siempre esterilizado. Transferir el material a un envase estéril.

Conservar en envase herméticamente sellado y resistente a la humedad. Llevar o enviar al laboratorio.

Material de raspado, filtros de aire, barreduras, polvo, desechos, etc.

Cortar o recoger, por lo menos, 200g de material con un bajalengua esterilizado, espátula, cuchara o pinzas y colocar en bolsas de plástico o frascos de boca ancha, todo ello esterilizado.

Igual al anterior, según el material.

Hisopados ambientales o de la superficie de los equipos

Humedecer el hisopo con agua peptonada esterilizada al 0.1% con agua destilada bufferada y pasar por las superficies de contacto de los equipos o las superficies ambientales. Colocar el hisopo en caldo de enriquecimiento.

Empacar, rotular y enviar como hisopado fecal.

Aire

Tocar la placa o el liquido con un dispositivo para muestreo de aire, o dejar que se asiente sobre el caldo o en las placas.

Cerrar con cinta aisladora, rotular o llevar al laboratorio. Refrigerar las muestras liquidas.

Agua

Tomar muestras con antecedentes, incluyendo agua en botellas, en refrigeradores, cubitos de hielo y tanques. Tomar muestras de agua del grifo después de dejarla correr durante 10 segundos. Tomar muestras de agua de fuente u origen, después de dejarla correr durante 5 minutos. Dejar el frasco estéril bajo el chorro de agua y llenar hasta 2.5cm de la tapa. Recoger de 1 a 5 litros. Pueden usarse alternativamente filtros de membrana. Los hisopos de Moore pueden utilizarse para tomar muestras de agua en arroyos o cañerías, mantenerlos en posición hasta 48 horas y luego transferirlos a frascos con caldo de enriquecimiento.

 

 

Cerrar con cinta aisladora; rotular. Empacar con material absorbente. Poner en una caja y llevar o enviar al laboratorio. Generalmente no se necesita refrigeración.

 

 

3. INSTRUCCIONES PARA LA TOMA DE MUESTRAS DE ESPECÍMENES CLÍNICOS DE MANIPULADORES PARA EXÁMENES BACTERIOLÓGICOS

 



TIPO DE ESPÉCIMEN

TÉCNICA DE RECOLECCIÓN

CONSERVACIÓN Y TRANSPORTE

TIPO DE PRUEBA

Sub-ungueal

1. Humedecer un hisopo con solución salina estéril o caldo

Muller Hinton.

2. Recoger el material e introducirlo inmediatamente en el medio de transporte.

Llevar inmediatamente al laboratorio a temperatura ambiente. Si no es posible, dejar así durante 24 horas, como máximo. Después colocar un hisopo con hielo.

Investigación de:

E.coli fecal

Salmonella

Shigela

Estafilococos

Lesiones de la piel:

Furúnculos,

Abscesos,

secrecionales en general,

(principal

mente de brazos, manos, dedos, cuello y cara)

 

1. Limpiar la piel con solución fisiológica o con desinfectante débil, para evitar la contaminación con gérmenes saprófitas.

2. Presionar la lesión con ayuda de gasas estériles y coger la muestra con el hisopo estéril procurando coger la mayor cantidad posible de secreción.

3. Si la lesión es cerrada, desinfectar la piel y pensionar con jeringa estéril.

Si no es posible el envío inmediato al laboratorio, colocar el hisopo o el material cogido con jeringa dentro de un tubo estéril o en el medio de transporte.

En caso de que no sea posible el envío dentro de 24 horas, colocar en un depósito con hielo, hasta la entrega al laboratorio.

Investigación de:

Estafilococos

Orofaringe y fosas nasales

Recoger el material con un hisopo estéril e introducirlo inmediatamente en el medio de transporte.

Enviar inmediatamente al laboratorio. Si no es posible el envío dentro de 24 horas, colocar en un depósito con hielo hasta la entrega.

Investigación de: Estafilococos

Vómitos

El paciente podrá vomitar directamente en un depósito estéril o en una bolsa plástica.

Se puede recoger de un depósito o receptáculo limpio mediante una cuchara o espátula y colocarlo en envase estéril.

Mantener refrigerado hasta su análisis pero NO CONGELAR.

Transportar rápidamente al laboratorio

Agentes patógenos

Toxinas

Orina

Limpiar el área alrededor del orificio uretral con yodo al 4%. Colectar hasta 30 ml en un frasco estéril y taparlo.

Mantener refrigerado hasta su análisis pero NO CONGELAR.

Transportar rápidamente al laboratorio

Agentes patógenos

Tóxicos químicos y naturales

Sangre

Tomar la sangre de la vena media anticubital. Tomar 15 ml en el caso de adultos, 3 ml en el caso de niños. Centrifugar la sangre, colocar el suero en un vial pequeño y guardarlo a –18°C. Otra forma es dejar la sangre en reposo y extraer el suero con una pipeta y colocarla en un vial.

 

 

Refrigerar la sangre. Nunca congelarla porque se lisan los hematíes y alteran la muestra.

El suero puede congelarse

Anticuerpos, agentes y toxinas

 

 

4. INSTRUCCIONES GENERALES PARA LA RECOLECCIÓN DE MUESTRAS FECALES

RECOLECCIÓN CONSERVACIÓN TRANSPORTE

TIPO DE AGENTE

 

VIRUS

BACTERIAS

PARÁSITOS

Cuándo recolectar

Dentro de las 48-72 horas siguientes al inicio de la enfermedad.

Durante períodos de diarrea activa (preferiblemente lo más pronto posible luego del inicio de la enfermedad).

En cualquier momento luego del brote de la enfermedad (preferiblemente lo más pronto posible luego del brote de la enfermedad).

Cuánto recolectar

La mayor cantidad posible de muestras de heces de cada una de las 10 personas enfermas (por lo menos, 10cc por cada persona); también deben tomarse muestras de 10 controles.

Dos hisopos rectales o hisopos de heces frescas de cada una de las 10 personas enfermas; también pueden presentarse muestras de 10 controles.

Una muestra de heces fresca de cada una de las 10 personas enfermas; también pueden presentarse muestras de 10 controles.

Método de recolección

Colocar muestras de heces frescas (preferentemente líquidas), que no se hayan mezclado con orina, en envases limpios y secos; (por ejemplo, en envases para recoger muestras de orina).

Para preparar los hisopos rectales. Primero, mojar cada uno de los dos hisopos en medio de Cary-Blair, luego insertar en secuencia 1-1,5 pulgadas en el recto y hacer rotar el hisopo lentamente. Colocar ambos hisopos en el mismo tubo que contiene el Cary-Blair. Romper las porciones superiores de los palillos de los hisopos y bote.

Recoger una muestra de heces que no esté mezclada con orina en un recipiente limpio. Colocar una porción de cada muestra de heces en una solución preservativa de formalina y alcohol polivinílico a una proporción de 1 parte de heces por 3 partes de preservativo. Mezclar bien.

Almacenamiento del espécimen después de su recolección

Refrigerar de inmediato a 4o C. NO CONGELAR si se prevé el uso de un microscopio electrónico.

Refrigerar inmediatamente a 4o C si las pruebas van a hacerse dentro de las 48 horas siguientes a la recolección de muestras; de lo contrario congelar las muestras a -70o C.

Guardar a temperatura ambiente o refrigerar a 4o C. NO CONGELAR.

Transporte

Mantener las muestras refrigeradas. Utilizando un recipiente en material aislante, colocar las muestras en bolsas selladas sobre hielo o sobre paquetes refrigerantes. Enviar por correo urgente. NO CONGELAR.

Refrigerar tal como se ha indicado hacer con especímenes virales. En el caso de muestras congeladas, colocar las muestras selladas en bolsas sobre hielo seco. Despachar en una caja de material aislante por el correo nocturno.

Refrigerar tal como se ha indicado hacer con especímenes virales. Para las muestras a temperatura ambiente despachar en recipientes a prueba de agua. NO CONGELAR.

 

Identifique cada envase que contenga una muestra con un marcador a prueba de agua. Coloque las muestras en envases sellados y a prueba de agua (por ejemplo, bolsas plásticas). Prepare un lote y envíe por correo nocturno, previsto para llegar a su destino en día laboral durante las horas de oficina.


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