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ANEXO C
EQUIPAMENTOS E INSTRUÇÕES PARA COLETA DE
AMOSTRAS NA PESQUISA DE ETA
1. EQUIPAMENTOS E MATERIAIS PARA COLETA DE AMOSTRAS
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TIPO DE EQUIPAMENTO
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DESCRIÇÃO
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Embalagens para amostras esterilizadas
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Sacolas plásticas (descartáveis ou tipo
Whirl-pak); vidros de boca larga (0,3 a 1,5 litros de
capacidade), com tampa de rosca; garrafas para amostras de
água (as garrafas para água clorada devem conter
tiossulfato de sódio suficiente para garantir uma
concentração de 100 mg desse composto para cada
litro de amostra); papel de estanho ou de embrulho, grosso;
recipientes de metal.
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Utensílios esterilizados e embrulhados para coleta de
amostras
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Colheres; conchas; abaixadores de língua; facas de
açougueiro; fórceps; pinças; espátulas;
brocas; tubos metálicos (1,25 a 2,5 cm de diâmetro, 30
a 60 cm de comprimento); pipetas; tesouras; swabs de Moore
(chumaços compactos de gazes feito com retalhos de 120 por
15 cm, amarrados no centro por um fio ou arame longo e forte para
amostras a serem colhidas em bueiros, esgotos, riachos e
tubulações, etc.).
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Equipamentos para a coleta de amostras -
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Embalagens de papelão (com tampa) para amostras de fezes;
vidros contendo um conservante e uma solução para
transporte; recipientes e papelão protetores para amostras
de fezes; swabs esterilizados; equipamentos para coleta de
amostra retal com swab, chumaço de gaze esterilizado de 10 x
10 cm, tubos para transporte.
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Dispositivos para registro de temperatura
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Termômetro tipo baioneta (para carne), com
variação de -17,8 a 104oC (-0,04 a
219,2ºF) e comprimento mínimo de 13 cm (de
preferência 20 cm) em embalagem protetora; bulbo
termométrico (variação de -17,8 a
104oC)(-0,04 a 219,2ºF) em embalagem protetora;
marcador de ponta fina de feltro; rolo de fita adesiva;
pedaços de papelão à prova d’água
(impermeáveis), com furos e atados com arame; lanterna;
broca elétrica; palitos de fósforo; água
peptonizada a 0,1%; água destilada com
solução-tampão (5 ml em tubos com tampa de
rosca); porta-tubos de laboratório; caixas com
vedação; formulários para pesquisadores.
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Equipamento de apoio
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Marcador de ponta fina; rolo de fita adesiva; rótulos;
cartões impermeáveis com perfuração e
arame; lanterna; broca elétrica; palitos de fósforo;
água peptonizada ou água destilada com
solução-tampão (5 ml em tubo com tampa de
rosca), porta-tubos; embalagem com vedação; medidor
de pH; hidrômetro; protocolos de pesquisa.
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Agentes esterilizadores
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Álcool etílico (95%), tocha de propano.
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Gelo
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Gelo embalado; gelo em sacolas plásticas; líquido
em latas para congelar; sacolas ou jarras de plástico ou
borracha para encher com água e congelar; sacolas de
plástico muito resistentes para gelo.
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Roupas
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Uniformes brancos para laboratórios; toucas e gorros
descartáveis; luvas de plástico descartáveis;
botas de plástico descartáveis (opcionais).
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Organizar, no mínimo, 15 sacolas plásticas ou
vidros de boca larga esterilizados, 15 colheres esterilizadas, oito
embalagens para coleta de amostras ou dispositivos semelhantes, e
uma unidade de cada kit de equipamento e de
esterilização, reunidos num kit a ser guardado no
órgão responsável pela pesquisa de
enfermidades transmitidas por alimentos. Para que esse kit sempre
esteja em condições de uso imediato, torna-se
necessária a re-esterilização ou
substituição de utensílios, meios ou materiais
para transporte esterilizados.
2. COLETA, CONSERVAÇÃO, EMBALAGEM E REMESSA DE
AMOSTRAS DE ALIMENTOS
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AMOSTRAS
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MÉTODOS DE COLETA E
CONSERVAÇÃO
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MÉTODOS DE EMBALAGEM E REMESSA
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Alimentos sólidos ou mistura de alimentos
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Cortar ou separar porções de alimentos com uma
faca esterilizada ou outro utensílio, se necessário.
Coletar, com assepsia, pelo menos 200 gramas de amostra com
utensílios esterilizados e transferir para uma sacola
plástica esterilizada ou para um vidro de boca larga. Tomar
diferentes amostras da parte de cima, do centro e de outros
lugares, conforme necessário. Refrigerar a amostra.
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Rotular. Colocar gelo ao redor da embalagem com a amostra.
Não congelar nem usar gelo seco. Levar a amostra ao
laboratório ou enviar pelo meio mais rápido
possível.
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Alimentos líquidos ou bebidas
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Misturar ou agitar. Coletar a amostra de acordo com uma das
seguintes maneiras:
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1. Colocar, com um elemento esterilizado, pelo menos 200 ml em
embalagem esterilizada. Refrigerar a amostra.
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Idem.
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2. Colocar o líquido em um tubo longo, esterilizado, e
cobrir a abertura superior com o dedo ou a palma. Transferir o
líquido para uma jarra ou uma sacola esterilizada.
Refrigerar a amostra.
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Idem.
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3. Submergir o swab de Moore no recipiente com o alimento
líquido ou inseri-lo na tubulação para que o
líquido circule através dele. Conservar nessa
posição durante várias horas, se
possível. Transferir o swab para um vidro que
contenha meio de cultura.
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Levar a amostra ao laboratório o mais rápido
possível; em geral não necessita
refrigeração.
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4. Quando o líquido não é viscoso, passar 1
ou 2 litros por um filtro de membrana. Transferir, com assepsia, o
chumaço do filtro para um vidro com meio de cultura.
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Idem.
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Alimentos congelados
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Usar um dos seguintes procedimentos:
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Manter congelado. Usar gelo seco quando necessário.
Coletar ou enviar em embalagem com vedação.
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1. Enviar ou levar pequenos volumes congelados para o
laboratório, sem descongelar ou abrir.
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2. Perfurar com broca esterilizada de diâmetro grande, a
partir da parte superior da embalagem, em sentido diagonal, pelo
centro, até a parte inferior do lado oposto. Repetir do
outro lado até coletar pelo menos 200 g.
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3. Moer o material congelado com martelo e cinzel esterilizado e
coletar os farelos com um elemento esterilizado; transferir pelo
menos 200 g para uma embalagem estéril. Usar gelo seco, se
necessário. Coletar ou enviar em embalagens com
vedação.
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Carnes ou aves cruas
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A amostragem será feita através de um dos
seguintes procedimentos:
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Utilizar o mesmo método dos alimentos sólidos ou
líquidos, ou, quando se encontra em meio de cultura, levar
ao laboratório o mais rápido possível.
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1. Com um elemento estéril ou luva plástica
estéril, colocar a carcaça da ave ou um pedaço
grande de carne em sacola plástica estéril. Adicionar
100 a 300 ml de meio de cultura. Remover a amostra e fechar a
sacola.
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2. Passar uma esponja estéril sobre uma área
grande da carcaça ou do corte de carne. Colocar o
swab em um vidro com meio de cultura.
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3. Molhar um swab em água destilada com
solução-tampão, ou com água peptonizada
a 0,1%. Coletar com um swab em uma parte grande da carcaça
ou do corte de carne. Colocar em meio de cultura específico
para o patógeno pesquisado.
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4. Com uma luva de plástico estéril limpar a
carcaça com quadrados de gaze esterilizada. Colocar a gaze
em um vidro com meio de cultura.
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5. Cortar, com assepsia, uma porção de carne ou
pele de diferentes partes da carcaça ou do corte de carne,
ou remover uma porção da carcaça. Colocar pelo
menos 200 g de amostra em sacola plástica ou frasco de vidro
esterilizado. Refrigerar.
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6. Colocar a carcaça da ave ou uma porção
grande de carne em sacola de plástico grande, esterilizada.
Adicionar 100 ml de meio de cultura e agitar. Retirar a amostra e
fechar a sacola.
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Alimentos desidratados
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Inserir um tubo oco esterilizado da parte superior de um lado da
embalagem, no sentido diagonal, pelo centro, até a parte
inferior do lado oposto. Segurar a parte superior e transferir a
embalagem esterilizada. Repetir do lado oposto até recolher
pelos menos 200 g. Um método alternativo é recolher
material com colher, espátula, abaixador de língua ou
elemento semelhante, sempre esterilizado. Transferir o material
para uma embalagem estéril.
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Conservar em embalagem hermética, resistente à
umidade. Levar ou enviar para o laboratório.
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Material de raspagem, filtros de ar, varredura, poeira, detrito,
etc.
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Cortar ou coletar pelo menos 200 g de material com abaixador de
língua esterilizado, espátula, colher ou
pinça, e colocar em sacolas de plástico ou vidros de
boca larga esterilizados.
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Idem, dependendo do material.
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Amostragem do meio-ambiente ou da superfície dos
equipamentos obtida com swab.
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Molhar o swab em água peptonizada esterilizada a 0,1%, ou
água destilada com solução-tampão e
passar nas superfícies de contato dos equipamentos ou nas
superfícies ambientais. Colocar o swab em meio de
cultura.
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Embalar, rotular e enviar como swab fecal.
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Ar
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Tocar a placa ou o líquido com um dispositivo para
amostragem de ar ou deixar que fique depositado no meio de cultura
ou nas placas.
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Fechar com fita adesiva, rotular ou levar ao laboratório.
Refrigerar as amostras líquidas.
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Água
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Coletar amostras com antecedentes, incluindo água em
garrafas térmicas, pedras de gelo e tanques. Coletar
amostras de água de torneira depois de abri-la por 10
segundos. Coletar amostras de água de fonte após
escorrer 5 minutos. Colocar o frasco estéril embaixo do jato
de água e encher até 2,5 cm da tampa. Coletar de 1 a
5 litros. Podem ser utilizados, alternativamente, filtros de
membrana. Os swabs de Moore podem ser usados para amostragem
de água em riachos ou tubulações, mantendo-os
na posição por 48 horas, e depois transferir para o
meio de cultura.
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Fechar com fita adesiva, rotular. Embalar com material
absorvente. Colocar na caixa e levar ou enviar para o
laboratório. Em geral não requer
refrigeração.
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3. INSTRUÇÕES PARA COLETA DE AMOSTRAS DE
ELEMENTOS CLÍNICOS DE MANIPULADORES PARA EXAMES
BACTERIOLÓGICOS
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TIPO DE ELEMENTO
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TÉCNICA DE COLETA
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CONSERVAÇÃO E TRANSPORTE
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TIPO DE TESTE
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Sub-ungueal
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1. Molhar um swab com solução salina
estéril ou meio de cultura Muller-Hinton.
2. Coletar o material e introduzir imediatamente no meio de
transporte.
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Levar imediatamente ao laboratório em temperatura
ambiente. Quando não for possível, manter assim por,
no máximo, 24 horas e depois introduzir swab com
gelo.
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Pesquisa de:
E. coli fecal
Salmonella
Shigella
estafilococos
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Lesões de pele:
furúnculos,
abscessos,
secreções em geral
(principalmente de braços, mãos, dedos,
pescoço e rosto)
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1. Limpar a pele com solução fisiológica ou
com desinfetante pouco potente para evitar a
contaminação com agentes saprófitos.
2. Exercer pressão sobre a lesão com ajuda de gaze
estéril, e coletar a amostra com swab estéril,
procurando remover a maior quantidade possível de
secreção.
3. Se a lesão estiver fechada, desinfetar a pele e
exercer pressão com seringa estéril.
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Quando não for possível enviar ao
laboratório imediatamente, colocar o swab ou o
material obtido com uma seringa dentro de um tubo estéril ou
no meio de transporte.
Quando a remessa não puder ser feita no prazo de 24
horas, colocar em um depósito de gelo até ser
entregue no laboratório.
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Pesquisa de:
estafilococos
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Orofaringe e fossas nasais
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Coletar o material com swab estéril e introduzir
imediatamente no meio de transporte.
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Enviar imediatamente ao laboratório. Quando a remessa
não puder ser feita no prazo de 24 horas, colocar em um
depósito de gelo até ser entregue.
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Pesquisa de: estafilococos
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Vômitos
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O paciente pode vomitar diretamente em depósito
estéril ou sacola plástica.
Pode ser coletado do depósito ou vasilhame limpo com
colher ou espátula e colocar em embalagem
estéril.
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Manter a amostra refrigerada até realizar o exame, mas
NÃO CONGELAR.
Transportar rapidamente ao laboratório.
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Agentes patógenos
Toxinas
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Urina
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Limpar a área ao redor do orifício uretral com
iodo a 4%. Coletar até 30 ml em embalagem estéril e
tampar.
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Manter a amostra refrigerada até realizar a
análise, mas NÃO CONGELAR.
Transportar rapidamente para o laboratório.
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Agentes patógenos
Tóxicos químicos e naturais
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Sangue
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Coletar o sangue da veia média anti-cubital. Coletar 15
ml em adultos, 3 ml em crianças. Centrifugar o sangue e
colocar o soro em tubo pequeno e armazenar a -18oC
(-0,4ºF). Ou então deixar o sangue em repouso e extrair
o soro com uma pipeta e colocar no tubo.
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Refrigerar o sangue. Nunca congelar as amostras, pois ocorre a
lise da hemácia, alterando a amostra.
O soro pode ser congelado.
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Anticorpos, agentes e toxinas
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4. INSTRUÇÕES GERAIS PARA COLETA DE AMOSTRA
FECAL
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COLETA CONSERVAÇÃO
TRANSPORTE
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TIPO DE AGENTE
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VÍRUS
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BACTÉRIAS
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PARASITAS
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Quando coletar?
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De 48 a 72 horas após o início da enfermidade.
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Durante períodos de diarréia ativa (de
preferência logo após o início da
enfermidade).
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A qualquer momento após diagnóstico do surto (de
preferência logo após o início do surto da
enfermidade).
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Quanto coletar?
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A maior quantidade possível de amostras de fezes de cada
uma em 10 pessoas doentes (pelo menos 10 cc por cada
indivíduo); coletar também amostras de 10
controles.
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Dois swabs retais ou swabs de fezes frescas de
cada uma de 10 pessoas doentes; também podem ser
apresentadas amostras de 10 controles.
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Uma amostra de fezes frescas de cada uma de 10 pessoas doentes;
também podem ser apresentadas amostras de 10 controles.
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Método de coleta
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Coloque amostras de fezes frescas (de preferência
líquidas), que não tenham sido misturadas com urina,
em embalagens limpas e secas, (por exemplo, em embalagens para
coletar amostras de urina).
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Para preparar os swabs retais, molhar, inicialmente, cada
um dos swabs em meio de Cary-Blair, depois inserir 2 a 3 cm no reto
e girar o swab lentamente. Colocar os dois swabs no
mesmo tubo com meio de Cary-Blair.
Quebrar a parte superior dos palitos do swab e
descartar.
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Coletar uma amostra de fezes que não esteja misturada com
urina em um recipiente limpo. Colocar uma porção de
cada amostra de fezes em uma solução preservativa de
formalina e álcool polivinílico, na
proporção de uma parte de fezes para três
partes de preservativo. Misturar bem.
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Armazenamento do material após a coleta
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Refrigerar imediatamente a 4oC (39,2 ºF).
NÃO CONGELAR quando for utilizar microscópio
eletrônico.
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Refrigerar imediatamente a 4oC (39,2ºF) quando
os testes forem feitos no prazo de 48 horas após a coleta
das amostras; caso contrário, congelar as amostras a
-70o C
(-94ºF).
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Guardar em temperatura ambiente ou refrigerar a 4oC
(39,2ºF). NÃO CONGELAR.
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Transporte
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Manter as amostras refrigeradas. Utilizar um recipiente
térmico para colocar as amostras em sacolas fechadas, com
gelo ou pacotes refrigeradores. Enviar pelo correio urgente.
NÃO CONGELAR.
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Refrigerar do mesmo modo que para espécies virais. No
caso de amostras congeladas, colocá-las em sacolas fechadas,
dentro de sacolas com gelo seco. Remeter em caixa térmica
pelo correio noturno.
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Refrigerar do mesmo modo que para as espécies virais.
Para as amostras a temperatura ambiente, a remessa deve ser feita
em recipientes à prova d’água. NÃO
CONGELAR.
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1 Identificar cada embalagem com uma amostra com um
marcador à prova d’água. Colocar as amostras em
embalagens fechadas e à prova d’água (por
exemplo: sacolas plásticas). Preparar um lote e enviar pelo
correio noturno, de modo a chegar no destino em dia útil,
durante o horário de expediente.
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